1. 模板核酸模板(靶基因或样品DNA)核酸的量与纯化程度是PCR成败与否的关键环节之一。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。DNA模板提取一般采用异硫酸胍或蛋白酶K法，pcr检测仪，要防止核糖核酸酶(ribonuclease，RNase)降解RNA。2. 引物PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，PCR扩增仪，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链作引物。每条引物链的浓度为0.1~1μmol或10-100pmol，以反应所需要的低引物量的浓度为好。3. DNA聚合酶TaqDNA聚合酶基因全长2496个碱基，75~80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷酸，在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性和良好的热稳定性，温度过高(90℃以上)或过低(22℃)都可影响TaqDNA聚合酶的活性。目前，有两种TaqDNA聚合酶供应，一种是从栖热水生中提纯的天然酶，荧光pcr仪，另一种为大肠菌合成的基因工程酶

引物退火

在PCR循环过程中，控制引物退火步骤的温度是很重要的。如果温度太高，引物退火的效率会降低。太低，它的特异性就会降低，这可能导致非特异性产物的扩增，降低你的PCR的整体效率。

为了确定退火步骤的温度，可以建立重复的PCR反应，每个反应使用不同的退火温度进行测试。

另外，也可以使用带有梯度块的PCR扩增仪。梯度区块允许在整个区块内同时使用一系列的温度，这意味着可以同时评估多个退火温度。一些PCR扩增仪配备了分段式温度块，而不是一体式温度块，这允许同时使用更大范围的温度。

1. 变温铝块式PCR仪热源用电阻丝、导电热膜、热泵式珀尔帖半导体元件制作，让带有凹孔的铝块升温，pcr仪，用自来水、制冷压缩机或半导体降温。优点：温度传导快，各管的扩增一致性好；反应管规格一致时无须外涂石蜡油；可用微电脑调节温度转换；仪器制冷部件可以在完成扩增后降温至4℃，保存样品过夜。缺点：管内反应液温度比铝块显示温度滞后；须使用且与铝块凹孔形状紧密吻合的薄壁耐热反应管；变温时难以快速克服铝块的热容量；压缩机制冷启动慢、重量大、滞后时间长。


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