钢制离心管

钢制离心管强度大，不变形，能抗热，抗冻，抗化学腐蚀，它的应用也是相当广泛，但使用时同样也应避免接触强腐蚀性的化学药品，如强酸、强碱等。尽量避免这些化学物质的腐蚀。

实验室常用的离心管有塑料的和玻璃的，一般塑料的用的较多， 因为玻璃的离心管不能用在高速或者离心机上。塑料的离心管又有PP（聚）、PC(聚碳酸酯)，PE(聚乙烯)等材质。PP的材质为半透明，化学及温度稳定性较好，也是实验室选用较多的一种材质。

预制梯度等密度离心法。要求在离心前预先配制管底浓而管顶稀的密度梯度介质，常用介质有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，离心管品牌，待分离样品一般铺在梯度液顶上，离心管批发，如需挟在梯度液中间或管底部，则需调节样品液密度。离心后，不同密度的样品颗粒到达与自身密度相等的梯度层，即达到等密度的位置而获得分离。

自成梯度等密度离心法。某些密度介质经过离心后会自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺经长时间离心后也可产生稳定的梯度。需要离心分离的样品可和梯度介质先均匀混合，离心开始后，梯度介质由于离心力的作用逐渐形成管底浓而管顶稀的密度梯度，与此同时，可以带动原来混合的样品颗粒也发生重新分布，到达与其自身密度相等的梯度层里，即达到等密度的位置而获得分离。

●打开水浴锅加热至37℃。

● 超净台上放好离心管（离心管规格选用15ml的），细胞培养瓶，移液管，紫外灭菌至少20至30分钟，无菌离心管，吹风5至10分钟除去臭氧。

● 37℃预热好要复苏细胞的培养液，也可以不用预热培养液，根据细胞情况选择。

●向离心管中加约5至10ml培养液，从液氮罐或-80℃中取出冻存细胞，立即将冻存管放入37℃水浴中并轻轻摇动，待融化后（约2min即可）立即将解冻的细胞转移至含培养液的离心管中，800-1000rpm下离心5min，弃上清，离心管，加适量完全培养液轻轻吹打重悬细胞后转移至细胞培养瓶中，轻晃使瓶底液体分散均匀，标好细胞名称、代数、复苏日期，显微镜下观察后放入37℃，5%CO2培养箱中。一般贴壁细胞过夜即可贴壁，换液和传代时间根据不同细胞生长情况而定。

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