稳定的温度

PCR扩增仪有各种形状和大小，有些比其他的更复杂，然而，它们都执行相同的基本功能，温度循环。

PCR每个阶段的温度对反应的成功至关重要，因此，PCR扩增仪的温度在各孔之间和整个组之间准确和一致是至关重要的，这被称为均匀性。

为了确保每次使用PCR扩增仪时都有一致的结果，荧光pcr仪，定期测试和校准温度块很重要。有经验的实验室科学家可以使用温度验证套件进行测试，但是任何重新校准都需要由合格的工程师来进行。

因此，强烈建议由合格的工程师定期对仪器进行维护和保养。这将保证PCR扩增仪保持在状态，并以状态工作。这些定期维护和校准活动的记录也将被要求用于实验室质量认证，如ISO17025。

PCR技术的原理类似于DNA的天然过程，其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成 [2]  。1. 模板DNA的变性模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，实时荧光定量pcr仪，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。2. 模板DNA与引物的退火(复性)模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链互补序列配对结合。3. 引物的延伸DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，pcr仪，以dNTP为反应原料，PCR扩增仪，靶序列为模板，按碱基配对与半保留原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留链。


将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。


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